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上海沛歐定氮儀和消化爐檢測辣木葉提取物中的蛋白質含量

更新時間:2021-01-06  |  點擊率:2520

摘要:采用凱氏法測辣木葉提取物中的蛋白質含量是國標推薦方法。

 

 

關鍵詞:沛歐全自動定氮儀、消化爐、辣木葉蛋白質含量

 

引言:辣木葉為辣木科辣木屬植物的樹葉,可食用,營養價值非常豐富,含有大量的蛋白質、氨基酸、纖維素及礦物質,具有降血糖、降脂、降壓、抗腫瘤、抗氧化、通便、改善睡眠等功效,長期食用可增強人體**功能,延緩衰老、預防**,其蛋白質的含量直接影響辣木葉的品質和營養功效,因此對辣木葉提取物蛋白質含量的測定具有重要的意義。為此我們使用沛歐全自動定氮儀SKD-1000(采用通用的顏色法判斷、具有多項磚利技術)紅外石英消化爐SKD-20S2對辣木葉提取物進行蛋白質檢測。

 

前言:GB2009.5食品安國內家標準 《食品中蛋白質的測定》**法要求測試。

 

參考文獻:GB2009.5

 

 

一、原理

辣木葉提取物樣品在濃硫酸和硫酸銅、硫酸鉀高溫下,把有機的細胞結構破壞,把氮元素氧化成硫酸銨,(為了使得樣品消化時不產生掛壁,必須采用樣品孔間溫差小和帶程序升溫功能的消化爐,否則會產生掛壁現象,導致消化失敗)消化完成后,需要將樣品冷卻到40℃左右,再把消化管放入定氮儀上。消化管內自動添加稀釋液、堿,反應杯內自動添加硼酸和顯色劑。對消化管內樣品加熱逸出氨氣和水蒸氣混合液,冷卻流到反應杯內,同時用標準鹽酸進行滴定,直到蒸餾結束和滴定到終點。計量消耗標準鹽酸的體積即可計算辣木葉提取物中蛋白質含量。

二、儀器和設備

1. 全自動定氮儀SKD-1000(上海沛歐分析儀器有限公司)

2. 消化爐SKD-20S2(上海沛歐分析儀器有限公司)

3. 萬分之**平

4. 滴管移液器

5.烘箱

三、試劑、樣品和標準品

1. 標準鹽酸濃度:0.1114 mol/L

2. 40%的氫氧化鈉

3.2%的硼酸+甲基紅和嗅甲酚綠混合的顯色劑(1:3.5

4.催化劑(硫酸銅:硫酸鉀為1:10的混合物)

5.蒸餾水

6.樣品:辣木葉提取物20201001

7.硫酸銨 

四、操作條件和程序

1. 樣品制備

用分析天平依次稱取2個空白,稱樣量為:①0.4082 g硫酸銅、3.6037 g硫酸鉀;②0.4045 g硫酸銅、3.6049 g硫酸鉀,5個辣木葉提取物待測樣品,稱樣量為:①0.4061 g硫酸銅、3.6010 g硫酸鉀、0.4058 g辣木葉提取物;②0.4048 g硫酸銅、3.6035 g硫酸鉀、0.4037 g辣木葉提取物;③0.4097 g硫酸銅、3.6060 g硫酸鉀、0.4032 g辣木葉提取物;④0.4069 g硫酸銅、3.6018 g硫酸鉀、0.4096 g辣木葉提取物;⑤0.4047 g硫酸銅、3.6009 g硫酸鉀、0.4011 g辣木葉提取物,將稱量好的空白與樣品分別置于標號的消化管中,依次向每個消化管中加入10 mL硫酸。

2. 樣品消化及消化爐參數設置

將制備好的空白及樣品按序號放入消化爐,蓋上排廢氣裝置,打開抽氣泵上水開關(前三個階段水流要大,使釋放出大量廢氣能及時排除,第四階段水流開小以避免酸霧排出),然后進行消化爐溫度-時間曲線參數設置:135度(20分鐘)--190度(25分鐘)---350度(5分鐘)----400度(70分鐘),消化爐根據時間-溫度曲線自動升溫和保溫,直到消化結束。把消化架取下放在冷卻架上,冷卻到40℃左右。

3.凱氏定氮儀儀器回收率測定

用分析天平精密稱量已烘干的硫酸銨(125 ℃烘箱烘2h2份,稱樣量為:0.1041 g0.115 g,分別置于標號的消化管中,然后在凱氏定氮儀儀器上進行測定參數設置進行測定,參數設置為:堿10 mL、稀釋液20 mL、樣品0.1041g0.115g、滴定酸為鹽酸、標準酸濃度為0.1114 mol/L、定時6 min、系數1、名稱硫酸銨1和硫酸銨2,參數設置完畢后,點擊屏幕上的測試程序中的調取,*后點擊樣品測試選項即可進行測試,測試完畢后查看兩次平行測定的含氮和消耗酸的數據是否正常,依次來判定該儀器運行是否正常。

4.凱氏定氮儀參數設置

  打開凱氏定氮儀顯示屏,點擊參數設置,依次輸入堿45 mL、稀釋液40mL、樣品克數、標準酸濃度0.11414 mol/L、定時6 min、樣品名稱、系數6.25,總共測5個樣品,因此要依次設置5次,一并保存,即可自動測定。

5.樣品蛋白質測定

  參數設置完后,便可將對應標號的空白和樣品的消化管接到儀器對應位置,先測空白,再依次測樣,測定數據依次自動保存在儀器硬件盤中,測完查詢記錄即可。

6.計算公式

蛋白質含量計算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m

氮含量計算公式y%=1.401(v-v0)c/m

x%---------蛋白質含量

y%---------氮含量

v--------消耗標準酸體積(ml)

V0------空白消化標準酸體積(ml)

C--------標準酸濃度(mol/L)

m--------樣品質量()

質控品采用烘干的分析純(99%)硫酸氨,硫酸銨理論含氮量21.21%

 

辣木葉1

 

辣木葉2

 

 

辣木葉3

 

 

辣木葉4

 

 

辣木葉

5

 

 

硫酸氨

1

 

 

硫酸氨

2

 

消耗標準酸(ml)

3.795

3.77

3.656

3.696

3.620

14.174

15.109

蛋白質含量(%)

9.1225

9.1262

8.8450

8.8018

8.8037

-----------

-----------

含氮量(%)

-------------

------------

--------------

--------------

--------------

21.2503

21.1487

空白消耗標準酸體積(ul)

551

551

551

551

551

247

247

 

結果分析:本次測試數據符合要求,數據可靠。

 

附:5009.5-2010 《食品安國內家標準食品中蛋白質的測定》

 

注意事項:

辣木葉提取物在取樣時注意均勻性,在消化樣品時,尤其是含糖、油脂的樣品容易起泡產生樣品掛壁,這時消化爐要有程序升溫功能,孔間溫差要小,避免樣品溫差所產生的升溫不協調而使樣品掛壁。

定氮儀要有足夠大的蒸餾功率,以便盡可能蒸餾出氨氣,提升回收率。如果全自動定氮儀則采用顏色法終點判斷的方法,保障數據準確性和儀器的線性度。

 

儀器安裝現場圖

 

 

 

 

 

 

 

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